Активный витамин В12 (голотранскобаламин) является самым ранним маркером дефицита витамина В12.

Витамином B12 называется любое из веществ группы кобаламинов. Они состоят из тетрапиррольного кольца, окружающего центральный атом кобальта, и различаются по расположению боковых групп, связанных с атомом кобальта. Преобладающей формой в сыворотке крови является метилкобаламин, тогда как преобладающей клеточной формой является 5’-деоксиаденозилкобаламин. Цианокобаламин является наиболее стабильной формой и используется в качестве контрольного соединения для определения концентрации кобаламинов сыворотки крови.

Незначительное количество кобаламинов синтезируется микрофлорой кишечника человека, но это не может обеспечить полностью потребность организма в витамине В12. Основным источником кобаламинов являются продукты животного происхождения (мясо, яйца, молоко и другие молочные продукты). В процессе пищеварения кобаламины связываются с белком желудочного сока, называемым внутренним фактором (фактором Кастла), и, впоследствии, всасываются в подвздошной кишке. Внутренний фактор (необходим для всасывания витамина B12. В процессе циркуляции кобаламины извлекаются и накапливаются в печени. Они поступают в плазму крови по мере необходимости, где переносятся белками: транскобаламином (около 20%) и гаптокоррином (около 80%).

Комплекс транскобаламин-витамин B12 называется голотранскобаламином (HoloTC) или активным витамином В12. Считается, что HoloTC содержит биологически доступный кобаламин, так как на всех клетках имеются специальные рецепторы к HoloTC. HoloTC обеспечивает поступление кобаламина во все клетки организма. Напротив, приблизительно 80% кобаламина переносится гаптокоррином, комплекс гаптокоррин-витамин В12 называется гологаптокоррин (HoloHC) и считается метаболически неактивным, так как специальные рецепторы к данному соединению имеются только на мембранах печеночных клеток. Более короткий период полураспада циркулирующего HoloTC по сравнению с периодом полураспада гологаптокоррина делает снижение уровня HoloTC одним из самых ранних маркеров дефицита витамина В12 (кобаламина).

По результатам проведенных многочисленных исследований, как и предполагалось, у пациентов с клиническими признаками дефицита витамина B12 уровни HoloTC низкие. В частности, сообщалось о низких значениях HoloTC у вегетарианцев, веганов и у населения с низким потреблением витамина B12. Кроме того, сообщалось о более низких уровнях HoloTC (но не витамина B12) в сыворотке крови у пациентов с синдромом Альцгеймера. Уровень HoloTC (активного В12) является отражением статуса витамина B12, независимо от недавнего потребления витамина. В связи с этим активный витамин В12 (HoloTC) является ранним маркером дефицита витамина В12 (ещё его называют биологически доступный В12). Около 50% пациентов с субклиническим дефицитом В12 имеют нормальную концентрацию общего витамина В12 в сыворотке крови и сниженный уровень HoloTC. Установлено, что при истощении депо витамина В12 уровень HoloTC снижается в крови раньше, чем снижается уровень общего витамина В12.

Основным местом депонирования витамина В12 является печень. Большое количество его поглощается селезёнкой и почками, несколько меньше - мышцами. Общие запасы кобаламина в организме взрослого человека составляют около 2-5 мг. Метаболизм витамина происходит очень медленно. Выводится он желчью, в кишечнике основная часть его реабсорбируется, т. е. ему свойственна энтерогепатическая циркуляция. Для развития дефицита витамина при сниженном поступлении его в организм требуется довольно длительное время. Витамин В12 играет важную роль в процессах метаболизма, в составе кобаламиновых ферментов участвует в белковом, жировом и углеводном обмене. При участии метилкобаламина в организме синтезируется активная форма фолиевой кислоты, которая принимает участие в образовании пиримидиновых и пуриновых оснований, нуклеиновых кислот.

При дефиците витамина В12 наиболее выраженные изменения развиваются в пролиферирующих клетках (клетках костного мозга, полости рта, языка и ЖКТ), что приводит к нарушению кроветворения, глосситу, стоматиту и кишечной мальабсорбции. Витамин В12 способствует накоплению в эритроцитах сульфгидрильных групп, главным образом, глутатиона, поэтому его недостаток ведёт к нарушению деления и созревания эритроцитов и развитию мегалобластической анемии.

Витамин В12 является кофактором фермента гомоцистеинметилтрансферазы, участвующей в превращении гомоцистеина в метионин. Метионин важен для синтеза фосфолипидов и миелиновой оболочки нейронов, поэтому дефицит витамина В12 сопровождается неврологической симптоматикой (психические расстройства, полиневриты, фуникулярный миелоз — поражение спинного мозга). Неврологические симптомы дефицита витамина В12 различны в зависимости от тяжести патологии. К ранним признакам относится дисфункция задних рогов спинного мозга с нарушением походки. Позже у них развивается поражение пирамидного, спиномозжечкового и спиноталамического трактов, сопровождающееся мышечной слабостью, прогрессирующей спастичностью, гиперрефлексией, ножницеобразной походкой. При длительном дефиците витамина В12 возникают деменция и нейропсихические заболевания.

Дефицит витамина В12 может быть результатом недостаточности питания/диеты (вегетарианцы, веганы и пожилые люди); нарушения всасывания витамина В12 (гастрэктомия, заболевания ЖКТ); нарушение всасывания витамина в желудке аутоиммунного генеза (антитела к внутреннему фактору) и т.д.. Клинические признаки и симптомы дефицита кобаламина включают мегалобластную анемию, парестезии, невропатию, раздражительность, слабоумие, депрессию или психоз.

Диагноз дефицита витамина В12 (кобаламина) традиционно был основан на результатах исследования концентрации цианокобаламина (витамин B12) в сыворотке крови, клинических симптомах заболевания и данных объективного обследования. Однако, лабораторный тест: определение концентрации витамина В12 (цианокобаламина) оказался мало чувствительным и специфичным. Гематолог Viktor Herbert в 1986, 1994 годах предложил модель поэтапного развития дефицита витамина B12:

1 этап: Ранний отрицательный баланс витамина В12: Holo TC (активный витамин В12; голотранскобаламин) — снижен (< 25 пмоль/л); Holo HC (неактивный витамин В12; гологаптокоррин) — норма (> 133 пмоль/л); общий витамин В12 (цианокобаламин) — норма (> 148 пмоль/л);

2 этап: В12 — истощение: Holo TC (активный витамин В12; голотранскобаламин) — снижен (15 - 25 пмоль/л); Holo HC (неактивный витамин В12; гологаптокоррин) — снижен (<111 пмоль/л); общий витамин В12 (цианокобаламин) — снижен (<148 пмоль/л);

3 этап: В12-дефицитный эритропоез: Holo TC (активный витамин В12; голотранскобаламин) — снижен (<15 пмоль/л); Holo HC (неактивный витамин В12; гологаптокоррин) — снижен (<74 пмоль/л); общий витамин В12 (цианокобаламин) — снижен (<74 пмоль/л);

4 этап: В12-дефицитная анемия: Holo TC (активный витамин В12; голотранскобаламин) — снижен (<15 пмоль/л); Holo HC (неактивный витамин В12; гологаптокоррин) — снижен (<74 пмоль/л); общий витамин В12 (цианокобаламин) — снижен (<74 пмоль/л).

Конечно, такая модель имеет ряд неточностей и допущений, но в целом она отражает механизм развития дефицита витамина B12. Со времени, когда была предложена данная модель, было проведено достаточно большое количество исследований, результаты которых как подтверждали данную гипотезу, так и отрицали.

В целом определение концентрации активного витамина В12 в сыворотке крови имеет ряд преимуществ по сравнению со стандартным определением общего витамина B12:

• первый ранний маркер отрицательного баланса или дефицита витамина В12;
• показывает уровень фракции биологически доступного витамина В12;
• сниженный уровень активного витамина В12 может свидетельствовать о дефиците витамина В12, хотя уровень общего витамина В12 (цианокобаламина) может быть в пределах референсных значений;
• более короткий период полураспада (более динамично реагирует на изменения статуса витамина В12 в организме;
• результат теста отражает статус витамина В12, независимо от давности потребления витамина.

• Признаки недостаточности В12 при нормальном уровне общего витамина В12.
• Анемия и/или макроцитоз в общем анализе крови.
• Ранняя дифференциальная диагностика анемий.
• Состояние после гастрэктомии или илеоэктомии.
• Хронические воспалительные заболевания ЖКТ.
• Анатомические пороки развития тонкой кишки.
• Диагностика врождённых форм дефицита витамина В12.
• Гипергомоцистеинемия.
• Контроль состояния при строгой вегетарианской или веганской диете.
• Голодание.

• Кровь рекомендуется сдавать натощак (не менее 8 часов после последнего приёма пищи), до начала приема лекарственных препаратов (если это возможно) или не ранее чем через 1-2 недели после их отмены. При невозможности отмены препаратов, в направлении должно быть указано какие препараты и в каких дозах получает больной.
• Желательно за 1-2 дня до проведения исследования исключить из рациона питания жирную, жареную пищу и алкоголь, исключить тяжёлые физические нагрузки (занятия спортом, тренажёрный зал, фитнес и т.п.), медицинские процедуры (рентгенография, флюорография, УЗИ - исследования, ректальное исследование и физиотерапевтические процедуры).

Кровь берётся в вакуумную пробирку с активатором свертывания и сепарирующим гелем (красная/желтая крышка), сразу после заполнения пробирку необходимо перемешать, поворачивая на 180º 5-6 раз (Не встряхивать!). Укажите на этикетке пробирки Ф.И.О. пациента, дату и время. Затем пробирке следует дать постоять 20-30 минут при комнатной температуре (для образования сгустка). Отцентрифугировать при 3500 об/мин (2000g) - 10 минут, не позднее, чем через 2 часа после взятия. Пробирку передать в лабораторию в день взятия. До передачи курьеру хранить в холодильнике при температуре +2 - +8ºС.

Сыворотка крови

Хемилюминесцентный иммунный анализ

Единицы измерения: пмоль/л

25 – 165 пмоль/л

• хроническая почечная недостаточность;
• заболевания печени (острый и хронический гепатит, цирроз печени, печёночная кома);
• миелопролиферативные заболевания;
• метастазы злокачественных опухолей в печень;
• сердечная недостаточность.

• нарушение всасывания кобаламинов в ЖКТ (синдром мальабсорбции; резекция желудка, тонкой кишки; хронические воспалительные заболевания и анатомические пороки развития тонкой кишки; атрофический гастрит; паразитарные инвазии);
• болезнь Аддисона - Бирмера;
• болезнь Альцгеймера;
• врожденные нарушения метаболизма кобаламинов (оротовая и метилмалоновая ацидурия; дефицит транскобаламина; синдром Иммерслунда - Гресбека;
• недостаточное поступление витамина В12 с пищей (строгая вегетарианская или веганская диета; грудное вскармливание при низком содержание витамина в женском молоке; алкоголизм);
• дефицит фолиевой кислоты;
• приём некоторых лекарственных препаратов (антибиотики, противосудорожные средства, холестирамин, оральные контрацептивы, ранитидин, циметидин, метформин, триамтерен).

A020 Общий анализ крови CBC/Diff с лейкоцитарной формулой; A030 Лейкоцитарная формула (микроскопия); B220 Витамин B12 (цианокобаламин); B225 Фолиевая кислота; B021 Гомоцистеин

1. Ельчанинова С.А., Ройтман А.П. Витамины, биоактивные медиаторы./В: Долгов В.В., Меньшиков В.В., ред. Клиническая лабораторная диагностика: национальное руководство. Том 1.// М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012: 253-259.
2. Antony A.C. Megaloblastic anemias./ In: Hoffman R., Benz E.J. Jr., Silberstein L.E., et al., eds. Hematology: Basic Principles and Practice. 6th ed.// Philadelphia, Pa: Elsevier Saunders; 2012: chap 37.
3. Golding P.H. Holotranscobalamin (HoloTC, Active-B12) and Herbert’s model for the development of vitamin B12 deficiency: a review and alternative hypothesis. / Golding SpringerPlus. 2016; 5: 668.
4. Institute of Medicine, Food and Nutrition Board. Dietary Reference Intakes for Thiamin, Riboflavin, Niacin, Vitamin B6, Folate, Vitamin B12, Pantothenic Acid, Biotin, and Choline. Washington, DC: National Academy Press; 1998.
5. Salwen M.J. Vitamins and trace elements./ In: McPherson R.A., Pincus M.R., eds. Henry's Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. 22nd ed.// Philadelphia, Pa: Elsevier Saunders; 2011: chap 26.