Иммуногистохимическое исследование опухоли на микросателлитную нестабильность (MSI) включает в себя анализ белков генов MLH1, MSH2, MSH6 и PMS2. Эти гены кодируют одноимённые белки, которые в норме участвуют в системе репарации неспаренных нуклеотидов ДНК (MMR). При дефиците MMR (dMMR) происходит накопление мутаций в коротких повторяющихся последовательностях (микросателлитах), что приводит к MSI. Развитие методов молекулярной диагностики позволило выявить группу пациентов с опухолями, имеющими особый молекулярный патогенез, заключающийся в наличии дефекта системы репарации неспаренных нуклеотидов ДНК.

В процессе жизнедеятельности нормальные клетки организма претерпевают множество делений, что сопровождается многократной репликацией ДНК. Во время репликации спонтанно, либо под действием различных экзогенных воздействий (ультрафиолет, рентгеновские лучи, химические соединения и т.д.) ежедневно в каждой клетке человека возникают множественные повреждения и ошибки в синтезируемой цепи ДНК. Этот процесс не приводит к фатальным последствиям за счет функционирующих в норме в организме человека систем репарации ДНК, обеспечивающих генетическую стабильность. Одной из главных систем является система репарации неспаренных нуклеотидов ДНК (Mismatch Repair System – MMR), ключевую роль в функционировании которой играют четыре гена: MLH1 (mutL homologue 1), MSH2 (mutS homologue 2), MSH6 (mutS homologue 6) and PMS2 (postmeiotic segregation increased 2). Эти гены кодируют одноименные белки – MLH1, MSH2, MSH6, PMS2, существующие в виде гетеродимеров MLH1-PMS2 и MSH2-MSH6.

Часть опухолей имеет нарушение функционирования одного из этих генов из-за спорадических или герминальных (наследственных) мутаций, что приводит к нарушению MMR (dMMR). При этом следует отметить, что мутации в генах MLH1 и MSH2 приводят к протеолитической деградации второго белка-партнера, в отличие от мутации в генах PMS2 и MSH6, сопровождающихся деградацией только одноименного белка. Это происходит за счет того, что белки MLH1 и MSH2 могут образовывать гетеродимеры с другими белками системы репарации, такими как MSH3, MLH3, PMS1, таким образом, MSH6 может быть замещен в гетеродимере на MSH3, а PMS2 на PMS1 либо MLH3.

В ДНК имеются участки, где нуклеотиды образуют повторы от 1 до 6 оснований, так называемые микросателлиты. В процессе репликации ДНК могут происходить изменения в данных последовательностях в результате инсерции (вставки) оснований. В норме данные мутации устраняются MMR. Накопление таких изменений в микросателлитах приводит к возникновению состояния генетической нестабильности – генетической гипермутабельности, или микросателлитной нестабильности (Microsatellite Instability – MSI). Таким образом, MSI является фенотипическим свидетельством того, что система репарации (MMR) не функционирует нормально.

Опухоли, характеризующиеся наличием микросателлитной нестабильности, принято обозначать как MMR-дефицитные опухоли (dMMR/MSI-H). Опухоли, не имеющие мутаций, генетически стабильные, принято обозначать как MMR-профицитные опухоли (pMMR/MSS). Обозначение MSI-H (High) связано с выделением до недавнего времени высокого (high) и низкого (low) уровня микросателлитной нестабильности, основанного на количестве генов, подверженных мутации, определяемых методом ПЦР. В настоящее время, согласно рекомендациям, MSI-Low опухоли включены в группу микросателлитно стабильных (MSS).

• Определения показаний к применению иммунотерапии анти-PD-1–антителами при метастатическом злокачественном новообразовании
• Колоректальный рак II стадии для определения показаний к проведению химиотерапии 5-фторурацилом в адъювантном режиме

Специальной подготовки не требуется. На исследование направляет лечащий врач по рекомендации врача-патологоанатома, проводившего первичное гистологическое исследование. К направлению прилагаются все данные пациента: предварительный диагноз, данные проводившихся исследований, проводимая терапия. Иммуногистохимическое исследование следует использовать в качестве дополнения к морфологическому исследованию, результаты не следует интерпретировать изолированно.

На исследование направляются все парафиновые блоки пациента, упакованные в контейнер. В сопроводительном письме указывается вид исследования и прикладывается предыдущее заключение (заключения) патологоанатома.

Парафиновый блок

Иммуногистохимический метод исследования с применением антител к белкам системы репарации неспаренных нуклеотидов ДНК (MMR): MSH2, MSH6, PMS2, MLH1

Результаты иммуногистохимического исследования оценивает врач-патологоанатом. По результатам проведенного исследования врач выдаёт заключение.

Некоторые варианты результатов исследования:

• Отсутствие экспрессии указывает на дефицит MMR (MSI). Например, в аденокарциноме толстой кишки с признаками MSI-H (микросателлитной нестабильности высокой степени) в опухолевых клетках отсутствует экспрессия MLH1 при позитивном внутреннем контроле;
• Сохранная экспрессия свидетельствует о нормальном функционировании MMR. Например, в аденокарциноме толстой кишки без признаков MSI-H экспрессия MLH1 в опухолевых клетках сохранена при позитивном внутреннем контроле;
• Гетерогенное окрашивание в некоторых случаях опухоли демонстрируют гетерогенную потерю экспрессии белка MMR, что требует учёта при интерпретации.

Заключение врача-патологоанатома не является клиническим диагнозом. Интерпретация результатов исследования должна проводиться только лечащим врачом в совокупности со всеми данными диагностики.

L050 Генетическая предрасположенность к наследственному неполипозному колоректальному раку (синдром Линча). Исследование кодирующих экзонов гена MSH2 (8 полиморфизмов): MSH2 (C1168T; Leu390Phe), (rs2059520), (T-118C), (G9C), (T-6C), (A12G), (G1032A; Gly322Asp), (G1906C; A636P).

1. Раскин Г.А., Мухина М.С., Каурцева А.С., и др. Определение микросателлитной нестабильности и состояния генов репарации неспаренных нуклеотидов ДНК (MMR/MSI) при опухолях различных локализаций. – СПб, 2022: 23 с.
2. Hopkins J.L., Lan L., Zou L. DNA repair defects in cancer and therapeutic opportunities. /Genes Dev. 2022 Mar 1; 36(5-6):278-293.