Антинуклеарный фактор (АНФ) - традиционное обозначение результатов исследования антинуклеарных антител (ANA), полученных при использовании метода непрямой реакции иммунофлуоресценции на клеточных и тканевых субстратах (в современной модификации – преимущественно на препаратах клеток HEp-2).

Антинуклеарные антитела – семейство аутоантител, направленных против внутриклеточных антигенов собственных клеток организма. Исторически антитела этой группы, направленные против ядер клеток, были впервые выявлены в сыворотке больных системной красной волчанкой (СКВ), поначалу из их точных мишеней были известны только двухспиральная ДНК и гистоны, поэтому они получили общее название «антинуклеарные антитела».

«Золотым стандартом» исследования антинуклеарных антител и рекомендуемым скрининговым тестом при подозрении на системные аутоиммунные ревматические заболевания является метод непрямой иммунофлуоресценции на препаратах HEp-2-клеток с указанием типа свечения и титров выявленных антител. Ядро и цитоплазма клеток НЕр-2 содержат все антигены, характерные для человеческой клетки, что позволяет выявлять в одном тесте основные виды антинуклеарных антител. Часть их имеет мишенью ДНК или связанные нуклеосомные белки, другие нацелены на РНК и рибонуклеопротеины, антигены ядерной оболочки или аппарата митотического веретена. Многие из рибонуклеопротеиновых мишеней могут находиться как в ядре клетки, так и в цитоплазме, а некоторые исключительно в цитоплазме, т. е. являются, по сути, не нуклеарными, а цитоплазматическими антигенами. Однако все эти антитела причисляют к антинуклеарным соответственно обозначению метода их исследования, при этом выявляемый данным методом спектр антител шире и объединяет антитела не только к ядерным, но и другим внутриклеточным аутоантигенам. ANA - ценный лабораторный маркер различных аутоиммунных заболеваний. Хотя бы однократное обнаружение антинуклеарных антител методом непрямой флуоресценции на клетках HEp-2 (или эквивалентным тестом) у пациента является критерием диагностики СКВ (системной красной волчанки), согласно EULAR/ACR 2019.

При системной красной волчанке и других системных ревматических заболеваниях иммунный ответ направлен против нуклеопротеиновых антигенов, т. е. комплексов нуклеиновых кислот и белков. Такие эндогенные нуклеопротеиновые аутоантигены могут образовываться в ходе процесса апоптоза эпителиальных клеток (каскада генетически запрограммированных реакций, приводящих к удалению поврежденной или дефектной клетки) и напоминают чужеродные вирусные частицы. Ускорение процессов апоптоза под действием ультрафиолетового облучения, вирусных инфекций или лекарственных препаратов, происходящее одновременно с нарушенным или замедленным удалением продуктов апоптоза, запускает аутоиммунные ответы при СКВ. При аутоиммунных заболеваниях аутоантитела к ядерным антигенам не обладают прямым цитотоксическим действием на клетки человека, однако иммунные комплексы способны запускать иммунологическое воспаление, особенно в сосудах микроциркуляторного русла, в том числе в почках, коже, центральной нервной системе, синовиальной оболочке суставов, плевре. Использование ИФА-методов в комплексе с выявлением антинуклеарного фактора на клетках линии НЕр-2 методом непрямой иммунофлуоресценции позволяет избежать ложноотрицательных результатов тестирования при скрининге системных ревматических заболеваниях.

Позитивность по антинуклеарному фактору на клеточной линии НЕр-2 отмечается при системной красной волчанке, системных ревматических и многих других аутоиммунных заболеваниях, что делает его универсальным скрининговым тестом в обследовании больных с подозрением на системную аутоиммунную патологию. Положительный результат ANA отмечается более чем у 90% больных с диффузными болезнями соединительной ткани, такими как СКВ и кожные формы этого заболевания, склеродермия и ее разновидности, смешанное заболевание соединительной ткани, синдром Шёгрена. Выявление антинуклеарного фактора имеет большое значение в диагностике ювенильного ревматоидного артрита. Данные аутоантитела могут быть обнаружены при многих других аутоиммунных (тиреоидит, диабет, аутоиммунные заболевания печени), инфекционных (вирусный гепатит), воспалительных и онкологических заболеваниях. Встречаемость антинуклеарного фактора достигает 1-3% у клинически здоровых людей и несколько возрастает у лиц старше 65 лет.

• В комплексе диагностики системной красной волчанки (СКВ)
• Подострая кожная волчанка и другие разновидности кожной волчанки
• Смешанные заболевания соединительной ткани
• Синдром Шёгрена и ассоциированные заболевания
• Диффузная и локализованная склеродермия, CREST-синдром
• Воспалительные миопатии (полимиозит и дерматомиозит)
• Ювенильный хронический артрит
• Аутоиммунный гепатит
• Первичный билиарный цирроз и склерозирующий холангит
• Полинейропатии и миелит.

Кровь на иммунологические исследования рекомендуется сдавать натощак (не менее 8 часов после последнего приёма пищи). Желательно за 1-2 дня до проведения исследований исключить из рациона питания жирную, жареную пищу и алкоголь.

Кровь берётся в вакуумную пробирку с активатором свертывания и сепарирующим гелем (красная/желтая крышка), сразу после заполнения пробирку необходимо перемешать, поворачивая на 180º 5-6 раз (Не встряхивать!). Укажите на этикетке пробирки Ф.И.О. пациента, дату и время. Затем пробирке следует дать постоять 20-30 минут при комнатной температуре (для образования сгустка). Отцентрифугировать при 3500 об/мин (2000g) – 10 минут, не позднее, чем через 2 часа после взятия. Пробирку передать в лабораторию в день взятия. До передачи курьеру хранить в холодильнике при температуре +2 - +8ºС.

Сыворотка крови

Непрямая иммунофлюоресценция (РНИФ) на клетках перевиваемой клеточной линии НЕр-2 с определением основных типов свечения ядра

Единицы измерения: титр

Выявление высоких титров антител (1/640 и выше) указывает на высокую вероятность системного ревматического заболевания или аутоиммунного заболевания печени и требует внимательного клинического, лабораторного и инструментального обследования. Отсутствие повышенных титров антинуклеарного фактора значительно снижает вероятность системных аутоиммунных заболеваний.

В низких титрах (до 1/160) антинуклеарный фактор может отмечаться у 1-2% здоровых лиц и родственников больных с системными заболеваниями. Частота положительных титров в популяции несколько увеличивается с возрастом. Низкие титры антинуклеарных антител могут встречаться при многих аутоиммунных, инфекционных и онкологических заболеваниях. Отсутствие высоких титров антинуклеарных антител значительно снижает вероятность системного ревматического процесса и может использоваться скорее для исключения, чем подтверждения диагноза.

Повышение титра АНФ в динамике указывает на обострение системного заболевания, так при СКВ титр коррелирует с тяжестью процесса и снижается при эффективной терапии.

< 1/80 - отрицательный

E040 Антинyклеарный антитела (ANA); E045 Антитела к 2-спиральной ДНК (anti-dsDNA); E045 Антимитохондриальные антитела (AMA); E044 Антинуклеарные антитела (аутоантитела к 17 антигенам: нуклеосомы; Sm; Sm/RNP; рибосомы; гистоны; U1-snRNP; SS-A/Ro60; SS-A/Ro52; SS-B/La; Scl-70; PM-Scl; CENP-A/B; PCNA; Jo-1; митохондриям; f-Актину; DFS-70) иммуноблот + Антитела к двуспиральной ДНК и Антинуклеарный фактор на клеточной линии Hep-2 IgG

1. Тотолян А.А., Лапин С.В. Методики диагностики аутоиммунных заболеваний./В: Меньшиков В.В., ред. Методики клинических лабораторных исследований. Справочное пособие. Том 2. Клинико-биохимические исследования. Иммунологические исследования.// М.: Лабора, 2009: 235-280.
2. Crow M.K. Etiology and pathogenesis of systemic lupus erythematosus./ In: Firestein G.S., Budd R.C., Gabriel S.E., et al, eds. Kelley's Textbook of Rheumatology. 9th ed.// Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2012: chap 79.
3. Fanouriakis A., Kostopoulou M., Andersen J., et al. EULAR recommendations for the management of systemic lupus erythematosus: 2023 update. /Ann Rheum Dis. 2024 Jan 2;83(1):15-29.
4. Siegel R.M., Lipsky P.E. Autoimmunity. In: Firestein G.S., Budd R.C., Harris E., et al., eds. Kelley's Textbook of Rheumatology. 8th ed. //Philadelphia, Pa: Saunders Elsevier; 2009: chap 15.
5. Tan E.M. Antinuclear antibodies in diagnosis and management. /Hosp Pract (Off Ed). 1983 Jan; 18(1):79-84.