Метод T-SPOT.TB (Oxford Immunotec) основан на применении антигенов ESAT-6 и CFP-10, входящих в состав комплекса M. tuberculosis. Используется технология ELISPOT (Enzyme-Linked Immuno Spot), позволяющая обнаружить в образце крови присутствие реактивных Т-эффекторных клеток, продуцирующих интерферон в ответ на воздействие указанных антигенов. Альтернатива кожному тесту (проба Манту) для выявления туберкулезной инфекции.

Диагноз активнай туберкулезной инфекции ставится на основании данных анамнеза пациента, клинической картины заболевания, данных рентгенологических исследований и результатов прямых методов лабораторного выявления Mycobacterium tuberculosis в мокроте или мазках (микробиологические культуральные методы, выявление ДНК возбудителя с применением ПЦР).

Диагностика латентной туберкулёзной инфекции затруднена в связи с отсутствием клинических и рентгенологических признаков заболевания, а также отсутствием возбудителя в пробах доступного биоматериала. Однако ее выявление важно для определения лиц, нуждающихся в контроле и превентивной терапии.

В настоящее время существуют два подхода к выявлению вероятной латентной инфекции:

• in vivo: внутрикожные тесты с очищенным или рекомбинантным туберкулезным аллергеном (проба Манту, Диаскинтест);
• in vitro: оценка ответа иммунных клеток обследуемого на антигены микобактерий туберкулеза по высвобождению гамма-интерферона (IGRA-тесты).

Все эти тесты основаны на оценке характера иммунной реакции человека на антигены возбудителя, т. е. не являются методами прямого выявления возбудителя.

В связи с достаточно высокой распространенностью туберкулеза в нашей стране, Министерство здравоохранения РФ рекомендует ежегодно проводить скрининговое обследование детей в возрасте от 1-го года до 17-ти лет на наличие туберкулезной инфекции (в том числе при поступлении в детские сады и школы). Профилактическое скрининговое обследование обычно проводят с использованием внутрикожных проб. При наличии определенных противопоказаний или информированном отказе родителей от применения внутрикожных проб ребенку допускается назначение альтернативных методов обследования. Они включают исследование крови, основанное на выявлении высвобождения гамма-интерферона специфически сенсибилизированными лимфоцитами. На данный момент имеются два коммерческих диагностических теста этого направления: 1) QuantiFERON®-TB Gold; и 2) T-SPOT.TB. Тест T-SPOT.TB допускается к использованию клиническими рекомендациями МЗ РФ и Российского общества фтизиатров по выявлению и диагностике туберкулеза у детей (2017 г). В соответствии с рекомендациями, при проведении скринингового обследования детей отрицательный результат T-SPOT.TB при отсутствии клинических симптомов заболевания (респираторного и интоксикационного характера, других локальных патологических проявлений) позволяет врачу-фтизиатру выдать справку об отсутствии у ребенка в настоящий момент активного туберкулеза.

К достоинствам этого метода можно отнести то, что подбор специфических антигенов исключает ложноположительные реакции, связанные с предшествующей вакцинацией БЦЖ и перекрестными реакциями с большинством нетуберкулезных микобактерий окружающей среды (за исключением M. kansasii, M. szulgai и M. marinum). Напротив, лица, инфицированные микобактериями туберкулезного комплекса (M. tuberculosis, M. bovis, M. africanum, M. microti, M. canetti) обычно имеют в крови Т-клетки, распознающие эти и другие антигены таких бактерий.

T-SPOT.TB тест не позволяет различать латентную инфекцию и активное заболевание. Следует также учитывать, что чувствительность и специфичность данного метода в целях скрининга туберкулезной инфекции не достигают 100%. Поэтому данный тест следует применять в комплексе со стандартными методами диагностики.

• В качестве альтернативы кожным пробам (Манту, Диаскин) в целях скринингового обследования детей на наличие туберкулезной инфекции
• В комплексной оценке риска наличия латентной туберкулезной инфекции (в том числе у лиц, вакцинированных БЦЖ или получавших БЦЖ-терапию)
• Диагностика активной туберкулезной инфекции в совокупности с оценками риска, клиническими, рентгенологическими и другими лабораторными показателями (в качестве дополнительного метода обследования).

Кровь на исследование рекомендуется сдавать натощак (не менее 8 часов после последнего приёма пищи). Желательно за 1-2 дня до проведения исследований исключить из рациона питания жирную, жареную пищу и алкоголь.

Кровь берется в 3 вакуумные пробирки с гепарином (зелёная крышка). Для обеспечения правильного соотношения кровь/антикоагулянт пробирка должна заполняться точно до указанного объёма. Сразу после заполнения пробирку необходимо аккуратно перемешать поворачиванием на 180º 8-10 раз (Не встряхивать!). Не центрифугировать! Пробирки укладываются в мешок, на котором указывается Ф.И.О. пациента, дата и время взятия материала, вид исследования, наклеивается штрих-код. Пробирки необходимо отправить в лабораторию в течение 2-4 часов при комнатной температуре. До передачи курьеру хранить при комнатной температуре!

Венозная кровь с гепарином

Технология ELISPOT (Enzyme-Linked ImmunoSpot), позволяющая выявлять в образце крови присутствие реактивных Т-эффекторных клеток, продуцирующих интерферон в ответ на воздействие антигенов комплекса M. tuberculosis.

Единицы измерения: тест качественный

В ответе указывается количество спотов (специфически сенсибилизированных Т-лимфоцитов) после инкубации по антигенам А (ESAT-6) и B (CFP-10). Приводится общая оценка результата теста в качественной форме.

Интерпретация по количеству спотов:

• ≤ 4 – отрицательный;
• 5-7 – сомнительный;
• ≥ 8 – положительный.

Возможные формы заключения:

• «Положительный»: образец содержит эффекторные Т-клетки, реактивные (специфически сенсибилизированные) к M. tuberculosis.
• «Отрицательный»: образец не содержит эффекторных Т-клеток, реактивных (специфически сенсибилизированных) к M. tuberculosis в значимой концентрации.
• «Сомнительный»: наличие эффекторных Т-клеток, реактивных (специфически сенсибилизированных) к M. tuberculosis сомнительно. Исследование необходимо повторить через 1-2 месяца.

Для использования результатов теста в целях установления диагноза или исключения туберкулеза, а также для оценки вероятности наличия латентной туберкулезной инфекции, при интерпретации результатов T-SPOT.TB необходимо принимать во внимание весь комплекс эпидемиологических, анамнестических и клинических данных и результаты других проведенных диагностических исследований. Примечание.

Отрицательный результат не исключает возможности экспозиции к M. tuberculosis или текущей инфекции. При получении отрицательного результата T-SPOT.TB теста лицам, имевшим недавний контакт с инфицированными и отрицательный результат T-SPOT.TB теста, а также при наличии значимых клинических признаков возможной инфекции следует повторить тестирование через шесть недель. По оценкам, приведенным производителем, чувствительность метода при исследовании лиц с подтвержденным культуральным методом туберкулезом составила 95,6%.

Положительный результат не позволяет различить латентную инфекцию и активное заболевание. Для подтверждения активной формы туберкулеза следует применить другие тесты (ПЦР или культуральное исследование мокроты, рентгенографию грудной клетки). Хотя применяемые в данном тесте антигены отсутствуют в вакцине БЦЖ и у большинства других микобактерий, ложноположительный результат может отмечаться у лиц с инфекцией M. kansasii, M. szulgai, M. gordonae или M. marinum. При подозрении на такие инфекции могут потребоваться альтернативные тесты. Применение T-SPOT.TB теста не оценивали у лиц, получавших более одного месяца противотуберкулезную терапию. По оценкам, приведенным производителем, специфичность метода в группе лиц с низким риском туберкулеза составила 97,1%.

G225 Микобактерии туберкулеза (M. tuberculosis – M. bovis complex), обнаружение ДНК

1. Выявление и диагностика туберкулеза у детей, поступающих и обучающихся в образовательных организациях. Клинические рекомендации. Москва, 2017. 30 с.
2. Русских О.Е., Кудлай Д.А. Место IGRA-тестов (тесты на определение интерферона-гамма) в диагностике туберкулезной инфекции. /Педиатрия им. Г.Н. Сперанского. 2020; 99 (6): 231-235.
3. Borkowska D., Zwolska Z., Michalowska-Mitczuk D., et al. [Interferon-gamma assays T-SPOT.TB for the diagnosis of latent tuberculosis infection]. /Pneumonol Alergol Pol. 2011; 79(4):264-271.
4. Bosshard V., Roux-Lombard P., Perneger T., et al. Do results of the T-SPOT.TB interferon-gamma release assay change after treatment of tuberculosis?. /Respir Med. 2009 Jan; 103(1):30-34.