Подтверждающий тест на HBsAg - представляет собой иммуноферментный анализ для подтверждения наличия поверхностного антигена вируса гепатита В (HBsAg) в сыворотке и плазме крови человека с помощью реакции нейтрализации со специфическими антителами. Он предназначен для подтверждения «положительных» образцов, выявленных при исследовании на скрининговых тест-системах. Положительными образцами («HBsAg – обнаружен») считаются только те образцы, для которых получен положительный результат в исследовании, проведенном с использованием подтверждающего набора. Наборы реагентов различаются по своей аналитической чувствительности и способности выявлять мутантные формы HBsAg.

Возбудителем сывороточного гепатита является вирус гепатита B (HBV), содержащий ДНК. Во время заболевания HBV продуцирует большое количество поверхностного антигена вируса гепатита B

(HBsAg), также известного как Австралийский антиген, который может быть выявлен в крови инфицированных людей. Он отвечает за связываение вируса с клетками печени и является структурной мишенью для нейтрализующих антител. После инфицирования вирусом гепатита B HBsAg является первым серологическим маркером, появляющимся спустя одну-десять недель после заражения, и две-восемь недель - до проявления клинических признаков.

HBsAg сохраняется в период острой фазы и выводится в период выздоровления. Невозможность элиминирования HBsAg в течение шести месяцев указывает на статус хронического носителя HBsAg. Тесты на HBsAg предназначены для выявления людей, зараженных инфекцией HBV, и для предотвращения передачи вируса через кровь и продукты крови, а также для мониторинга состояния зараженных людей в сочетании с другими серологическими маркерами гепатита B. В большинстве стран тестирование на HBsAg является частью программы дородового скрининга для выявления инфицированных HBV матерей и для предотвращения перинатальной инфекции HBV с последующей иммунизацией. Перед постановкой диагноза HBV рекомендуется провести подтверждающее тестирование.

• Положительный или сомнительный результат исследования на HBsAg.

Кровь на исследование рекомендуется сдавать натощак (не менее 8 часов после последнего приёма пищи). Желательно за 1-2 дня до проведения исследований исключить из рациона питания жирную, жареную пищу и алкоголь.

Кровь берётся в вакуумную пробирку с активатором свертывания и сепарирующим гелем (красная/желтая крышка), сразу после заполнения пробирку необходимо перемешать, поворачивая на 180º 5-6 раз (Не встряхивать!). Укажите на этикетке пробирки Ф.И.О. пациента, дату и время. Затем пробирке следует дать постоять 20-30 минут при комнатной температуре (для образования сгустка). Отцентрифугировать при 3500 об/мин (2000g) – 10 минут, не позднее, чем через 2 часа после взятия. Пробирку передать в лабораторию в день взятия. До передачи курьеру хранить в холодильнике при температуре +2 - +8ºС.

Сыворотка крови

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Единицы измерения: тест качественный

В подтверждающем тесте используется принцип нейтрализации специфическими антителами для подтверждения присутствия HBsAg в повторно реактивных образцах. Антитела к поверхностному антигену гепатита В (анти-HBs, человеческие) инкубируются с образцом. Если HBsAg присутствует в образце, он нейтрализуется антителами. Далее нейтрализованный HBsAg блокируется от связывания с микрочастицами, сенсибилизированными антителами к HBs. По сравнению с сигналом парного образца, не обработанного реагентом с антителами, наблюдается снижение сигнала. Образец считается подтвержденно положительным, если оптическая плотность не нейтрализованного образца (инкубированного с реагентом предварительной обработки) выше или равен пороговому значению (Cut Off) и значение оптической плотности нейтрализованного образца снижается по крайней мере на 50% по сравнению с не нейтрализованным образцом.

При подтверждении положительного или сомнительного результата скринингового исследования на HBsAg выдается ответ: HBsAg - «положительный», HBsAg (подтверждающий тест) - «положительный».

При неподтверждении положительного результата скринингового исследования выдаётся ответ – HBsAg – «отрицательный». Это означает вероятность каких-либо неспецифических влияний компонентов сыворотки крови обследуемого (например, присутствие лекарственных препаратов, онкологические заболевания, хронические инфекционные и инфекционно-аллергические заболевания и т.д.). В таком случае рекомендуется через некоторое время повторить исследование на HBsAg для исключения неспецифических влияний на результат теста.

E245 Поверхностный антиген вируса гепатита В (HbsAg) (ИФА); E246 Поверхностный антиген вируса гепатита В (HbsAg) (ИХЛА)

1. Клинические рекомендации – Острый гепатит B (ГB) у взрослых –2021-2022-2023 (14.09.2021) – Утверждены Минздравом РФ. 2021: 50 с.
2. Манзенюк И.Н., Чеканова Т.А., Масяго А.В. Инфекционная иммунодиагностика./ В Меньшиков В.В., ред. Методики клинических лабораторных исследований: Справочное пособие. Том 3. Клиническая микробиология. Бактериологические исследования. Микологические исследования. Паразитологические исследования. Инфекционная иммунодиагностика. Молекулярная диагностика инфекционных заболеваний.// М.: Лабора; 2009: 515-698.
3. Terrault N.A., Bzowej N.H., Chang K-M., et al. AASLD guidelines for treatment of chronic hepatitis B. /Hepatology. 2016 Jan; 63(1):261-283.
4. Wilkins T., Sams R., Carpenter M. Hepatitis B: Screening, Prevention, Diagnosis, and Treatment. /Am Fam Physician. 2019 Mar 1; 99(5):314-323.