Дифференцированное выявление ДНК возбудителей коклюша (Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica, Bordetella holmesii)

Мультиплексное ПЦР-исследование, используемое для выявления ДНК возбудителей коклюша Bordetella pertussis, Bordetella parapertussis, Bordetella bronchiseptica Bordetella holmesii методом ПЦР Real time в пробе пациента. Формат исследования — качественный.

Bordetella pertussis – возбудитель коклюша. Коклюш - острое высококонтагиозное инфекционное заболевание, передающееся воздушно-капельным путем, сопровождающееся развитием воспалительного процесса в гортани, трахее и бронхах. Чаще болеют дети до 5 лет, у взрослых болезнь нередко протекает атипично. Для клинического течения заболевания характерно 3 периода: катаральный, конвульсивного кашля и выздоровления. После выздоровления развивается стойкий иммунитет. Количество случаев коклюша значительно сократилось вследствие массовой вакцинации, тем не менее, даже в развитых странах, регулярно отмечаются вспышки заболевания.

Bordetella parapertussis - грамотрицательная аэробная бактерия, возбудитель паракоклюша. Симптомы паракоклюша схожи с проявлениями коклюша, но отличаются меньшей интенсивностью. Иммунитет, развившийся после инфицирования Bordetella pertussis, не защищает от заражения Bordetella parapertussis.

Bordetella bronchiseptica вызывает бронхисептикоз (бордетеллез), протекающий как острое респираторное вирусное заболевание, возникающее при контакте с инфицированными животными, у людей с ослабленной иммунной системой может вызывать пневмонию. Очень важно дифференцировать коклюш от паракоклюша и бронхисептикоза, так как больные коклюшем подлежат госпитализации, из-за высокой восприимчивости и осложнений данного заболевания.

Bordetella holmesii - бактерия, открытая в 1995 году. Это грамотрицательная коккобацилла, которая может вызывать у людей симптомы, похожие на коклюш, а также инвазивные инфекции. Её часто путают с Bordetella pertussis, поскольку обычные диагностические тесты на коклюш не являются видоспецифичными. Распространённость B. holmesii как возбудителя коклюша увеличилась в нескольких странах. Таким образом, анализы на B. holmesii важны для определения эпидемиологии коклюша, выбора эффективного лечения и выявления неэффективности вакцинации.

Этиологическая лабораторная диагностика включает выделение чистой культуры бордетелл и определение их видовой принадлежности; выявление ДНК возбудителей коклюша, обнаружение специфических антител.

Диагноз коклюша чаще всего ставиться на основании характерной клинической картины заболевания. При нетипичных формах заболевания и в целях дифференциальной диагностики используются лабораторные методы исследования. Основной метод лабораторной диагностики – бактериологический (выделить культуру можно максимум у 90% больных, окончательный ответ на 5-7 сутки), серологические методы менее пригодны для ранней диагностики коклюша. Ввиду нерезко выраженных симптомов паракоклюша, а также клинического сходства в ряде случаев паракоклюша с коклюшем бактериологическая диагностика имеет первенствующее значение. Большинство больных освобождается от бактерионосительства на 2-4 неделе заболевания. Обнаружение специфических IgM- и IgG-антител к различным антигенам B. pertussis проводят методом ИФА. Данный метод позволяет диагностировать коклюш при обращении пациента на поздних сроках (начиная с 3-й по 8-ю недели) болезни. Обнаружение ДНК методом ПЦР наиболее эффективно и востребовано для ранней диагностики, наибольшими диагностическими возможностями обладают методики с детекцией флуоресцентного сигнала в режи- ме реального времени, позволяющие обнаруживать и дифференцировать значимые для человека виды Bordetella. Оптимальное время для обнаружения ДНК методом ПЦР – до 4-х недель от начала заболевания. Диагноз коклюша, вызванный B. parapertussis, ставится в случае выделения культуры B. parapertussis; или обнаружения специфического фрагмента генома B. parapertussis методом ПЦР. Заболевание, вызванное B. Bronchiseptica или B. holmesii, диагностируется при выделении культуры или обнаружении специфического фрагмента генома методом ПЦР.

• Подозрение на коклюш, паракоклюш.
• Атипичное течение коклюша.
• Дифференциальная диагностика заболевания.
• Дифференциальная диагностика возбудителя.
• Обследование контактных лиц.

Специальной подготовки не требуется.

• Мазок из зева. Материал получают сухим стерильным ватным тампоном на палочке. После взятия материала поместить тампон в пробирку с транспортной средой, аккуратно прополоскать в среде для отделения материала, отжать остатки среды о стенки пробирки, тампон удалить, пробирку закрыть.
• Назофарингеальный смыв. Проводиться врачом, материал собирается в стериный контейнер с крышкой.
• Мокрота. Собирается в сухой стерильный контейнер. Закрыть контейнер.
• На этикетке пробирки (контейнера) указать Ф.И.О. пациента (или номер) и вид исследования. В направлении на исследование обязательно указать Ф.И.О. пациента, пол, дату рождения, номер пробирки (контейнера), вид материала и необходимые исследования. Материал должен быть доставлен в лабораторию в день взятия. До передачи курьеру, материал может храниться в холодильнике при температуре + 2 - +8ºС.

Мазок из зева, назофарингеальный смыв, мокрота

ПЦР Real time

Единицы измерения: тест качественный

ДНК (наименование возбудителя):

• обнаружена: инфицирование данным возбудителем.
• не обнаружена: нет инфицирования данным возбудителем.

E420 Антитела к возбудителю коклюша IgM; E425 Антитела к возбудителю коклюша IgG; G192 Возбудители коклюша (Bordetella pertussis); паракоклюша (Bordetella parapertussis); бронхосептикоза (Bordetella bronchiseptica); обнаружение ДНК; G193 Bordetella spp., обнаружение ДНК; H160 Посев на коклюш

1. Яцышина С.Б., Елькина М.А. Коклюш. // Лабораторная диагностика инфекционных болезней. Под ред. Акимкина В.Г., Твороговой М.Г. - Москва. ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 2020: 249-252.
2. Bouchez V., Guiso N. Bordetella pertussis, B. parapertussis, vaccines and cycles of whooping cough. /Pathog Dis. 2015 Oct; 73(7):ftv055.
3. Elgarini M., Menname Z., Sobh M., Hammoumi A. Bordetella holmesii: Causative agent of pertussis. /Arch Pediatr. 2024 Apr; 31(3):172-175.
4. He Q., Viljanen M.K., Arvilommi H., et al. Whooping cough caused by Bordetella pertussis and Bordetella parapertussis in an immunized population. /JAMA. 1998 Aug 19; 280(7): 635-637.
5. Nieves D.J., Heininger U. Bordetella pertussis. /Microbiol Spectr. 2016 Jun; 4(3).