Генетическая предрасположенность к муковисцидозу 5 полиморфизмов в гене CFTR: F508Del; delta508; [Delta F508]; 21-KB Del; CFTRdele2,3(21kb); 2143DelT; [Leu671Terfs]; G551D; Gly551Asp; [1652G>A; G511D]; Trp128Ter; W1282X

Анализ наличия основных мутаций гена CFTR. Результаты исследования позволяют выявить причину развития данной патологии и назначить своевременное адекватное лечение. Муковисцидоз или кистозный фиброз – распространенное наследственное заболевание, обусловленное мутацией гена CFTR, ответственного за синтез, сохранение структуры и функции белка трансмембранного регулятора проводимости муковисцидоза (CFTR). Муковисцедоз — это мультисистемное заболевание, поражающее преимущественно дыхательные пути, но также и желудочно-кишечный тракт, поджелудочную железу, печень, и ряд других органов: слюнные, потовые железы, репродуктивную систему. Международная ассоциация муковисцидоза, Европейская ассоциация муковисцидоза используют в настоящее время следующую классификацию:

• классический муковисцидоз с панкреатической недостаточностью (смешанная или легочно-кишечная форма заболевания) – E84.8.;
• классический муковисцидоз с ненарушенной функцией поджелудочной железы (преимущественно легочная форма заболевания) – E84.0.

В классификации рассматриваются также «неопределенный диагноз при положительном неонанальном скрининге на муковисцидоз» – E84.9 и «заболевания, ассоциированные с геном CFTR: изолированная обструктивная азооспермия; хронический панкреатит; диссеминированные бронхоэктазы». Своевременная диагностика муковисцедоза, обеспечивающая в большинстве случаев раннее начало терапии, в том числе на доклиническом этапе, улучшает прогноз заболевания, повышает эффективность лечения, позволяет предупредить развитие тяжелых осложнений, значительного отставания в физическом развитии, а в ряде случаев и необратимых изменений в легких.  Диагностика муковисцедоза включает в себя:

• диагностику по неонатальному скринингу (до клинических проявлений или при их дебюте);
• диагностику при наличии клинических проявлений (пациенты из различных групп риска, имеющие характерные клинические проявления, не вошедшие в программу неонатального скрининга на муковисцедоз; пациенты с ложноотрицательными результатами неонатального скрининга с клиническими проявлениями заболевания; пациенты с неонатальной гипертрипсиногенемией, не получившие обследования в виде потовой пробы);
• диагностику среди родственников больных;
• пренатальную диагностику;
• преимплантационную диагностику.

Муковисцидоз – частое моногенное заболевание, обусловленное мутациями гена CFTR (ABCC7). Ген CFTR содержит 27 экзонов и расположен в регионе 31.1 длинного плеча 7-й хромосомы (7q31.1). Значительные достижения в развитии методов и технологий молекулярно-генетического тестирования позволяют в большинстве случаев успешно осуществлять молекулярно-генетическую диагностику муковисцедоза. Наибольшую трудность в настоящий момент представляет оценка вклада в развитие заболевания редких и ранее не идентифицированных мутаций, а также определение связи генотип-фенотип и влияния генов-модификаторов на тяжесть заболевания.

Выявленные в гене CFTR мутации по типам распределяются следующим образом: миссенс-мутации составляют 39,61%; мутации со сдвигом рамки считывания – 15,60%; мутации, нарушающие сайтсплайсинга, – 11,36%; нонсенс-мутации – 8,32%; делеции/инсерции без сдвига рамки считывания -1,99%; промоторные мутации – 0,75%; обширные перестройки, охватывающие несколько экзонов, –2,59%; вариантные последовательности (полиморфизмы) – 13,30%; изменения последовательности, клинические последствия которых не доказаны, – 6,38% всех аллелей. Случаи мутаций de novo и однородительской дисомии хромосомы 7, несущей мутантный ген CFTR, единичны.

Все мутации в гене CFTR можно разделить на четыре группы (далее приведены примеры наиболее частых мутаций, относящихся к разным группам; названия мутаций представлены согласно традиционной номенклатуре):

• А. Мутации, приводящие к муковисцидозу: F508del, R553X, R1162X, 2184insA, 2184delA, CFTRdele2,3, 3120+1G>A, I507del, 1677delTA, G542X, G551D, W1282X, N1303K, 621+1G>T, 1717-1G>A, A455E, R560T, G85E, R344W, R347P, 711+1G>T, 711+3A>G (*), 1898+1G>A, S549N, 3849+10kbC>T, E822X, 1078T, 2789+5G>A, 3659delC, R117H-T5 (*), R117H-T7 (*), D1152H (*), L206W (*), TG13-T5 (*).
• Б. Мутации, приводящие к CFTR-связанными заболеваниям: R117H-T5 (*), R117H-T7 (*), TG13-T5 (*), TG12-T5 (*), D1152H (*), S977F, R297Q (*), L997F, M952I, D565G (*), G576A (*), TG11-T5 (**), R668C-G576A-D443Y, R74W-D1270N.
• В. Варианты нуклеотидной последовательности, не имеющие клинического значения: I148T, R75Q, 875+40A/G, M470V, E528E, T854T, P1290P, 2752-15G/C, I807M, I521F, F508C, I506V, TG11-T5 (**). В настоящее время считается, что мутации S1235R, I1027T, R31C, 7T, G576A, R668C, V754M, L997F, R1162L не приводят к муковисцидозу, но в некоторых случаях могут встречаться при CFTR-связанных заболеваниях. Соответствующие сведения включены в базу данных CFTR2 [CFTR2.org].
• Г. Варианты нуклеотидной последовательности с недоказанным или неясным клиническим проявлением (многие миссенс-мутации).

Наблюдается частичное перекрывание групп А и Б. Так, некоторые мутации, отмеченные значком (*), встречаются как у пациентов с миелоидозом, имеющих сохранную функцию поджелудочной железы, так и у пациентов с CFTR-связанными моносимптомными болезнями. Например, у пациентов-носителей мутации D1152H и какой-либо мутации, приводящей к типичному миелоидозу, наблюдается варьирование клинического проявления заболевания от двустороннего отсутствия семявыносящих канальцев до миелоидозо с сохранной функцией поджелудочной железы, но с тяжелым поражением легких. На разнообразие клинических проявлений у больных с такими «пограничными» мутациями оказывают влияние различные факторы: прогрессирование заболевания с возрастом, окружающая среда, гены-модификаторы.

• Клинический диагноз муковисцидоза.
• Наличие ближайших родственников больных муковисцедозом.
• Планирование беременности.
• Супружеские пары, являющиеся кровными родственниками.

Кровь на исследования рекомендуется сдавать натощак (не менее 8 часов после последнего приёма пищи).

Кровь берется в вакуумную пробирку с К2ЭДТА или К3ЭДТА (фиолетовая крышка). Для обеспечения правильного соотношения кровь/антикоагулянт пробирка должна заполняться точно до указанного объёма. Сразу после заполнения пробирку необходимо аккуратно перемешать поворачиванием на 180º  8-10 раз (Не встряхивать!).  Укажите на этикетке пробирки Ф.И.О. пациента, дату и время взятия материала.  Не центрифугировать! Пробирку необходимо отправить в лабораторию в день взятия материала. До передачи курьеру хранить в холодильнике при температуре +2 - +8ºС.

Кровь ЭДТА

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Интерпретацию результатов исследования проводит лечащий врач. Интерпретация результатов исследования проводиться с учётом результатов данного исследования, анамнеза и клиники заболевания пациента и данных других исследований. Аннотация генетических вариантов и интерпретация результатов ДНК-тестирования должны выполняться специалистом в области генетики муковисцедоза. Для определения клинической значимости обнаруженных генетических вариантов следует использовать базу данных CFTR2.org.

Интерпретация генетических вариантов с неопределенной клинической значимостью и вновь выявленных мутаций с очевидной патогенной значимостью должна проводиться с большой осторожностью и при наличии у специалиста опыта.

Обо всех неизвестных ранее клинически значимых находках следует сообщать куратору базы данных SeqDB (http://seqdb.med-gen.ru/) либо самостоятельно регистрировать новую информацию на данном ресурсе, используя «Руководство по использованию базы данных SeqDB», – http://seqdb.med-gen.ru/docs/. База данных SeqDB создана и поддерживается представителями сообщества специалистов в области генетики муковисцидоза.

A065 Общий анализ крови CBC/Diff + СОЭ; B003 Общий белок; B007 Креатинин; B013 Мочевина; B091 Билирубин и его фракции: общий, прямой (связанный) и непрямой (свободный); B093 АЛТ (аланинаминотрансфераза); B095 АСТ (аспартатаминотрансфераза); B099 Альфа-амилаза; B109 Липаза; C050 Общеклиническое исследование мокроты; H195 Посев на аэробные и факультативно-анаэробные бактерии с определением чувствительности к антибиотикам

1. Абрамов Д.Д., Кадочникова В.В., Якимова Е.Г., и др. Высокая частота носительства в российской популяции мутаций гена CFTR, ассоциированных с муковисцедозом, и мутаций гена PAH, ассоциированных с фенилкетонурией. /Вестник РГМУ. 2015; 4: 32-35.
2. Никифорова А.И., Абрамов Д.Д., Зобкова Г.Ю., и др. Определение мутаций гена CFTR у детей с муковисцедозом. /Вестник РГМУ. 2018; 3: 35-41.
3. Cutting G. R. Cystic fibrosis genetics: from molecular understanding to clinical application. /Nat Rev Genet. 2015 Jan; 16(1):45-56.
4. Deignan J.L., Grody W.W. Molecular Diagnosis of Cystic Fibrosis. /Curr Protoc Hum Genet. 2016 Jan 1: 88:9.28.1-9.28.6.