Мужское бесплодие. Определение генетических причин азооспермии (13 полиморфизмов): AZFa; USP9Y (AZF microdeletions; AZFa), AZFa; XGPY (AZF microdeletions; AZFa), AZFb; DYS218 (AZF microdeletions; AZFb), AZFb; DYS224 (AZF microdeletions; AZFb), AZFb; RBMY1D (AZF microdeletions; AZFb), AZFc; CDY1B (AZF microdeletions; AZFc), AZFc; DAZ1 (AZF microdeletions; AZFc), AZFc; DAZ1 (AZF microdeletions; AZFc), SRY; Y-control (AZF microdeletions; Y control marker), ZFY; XY-control (AZF microdeletions; XY control marker)

Исследование предназначено для выявления микроделеций локуса AZF (Azoospermia Factor) на Y-хромосоме и является важным этапом в диагностике азооспермии. Данное исследование выявляет наличие или отсутствие определенных участков ДНК в локусах AZFa, AZFb и AZFc, что может указывать на нарушения сперматогенеза.

Мужское бесплодие – нарушение мужской репродуктивной функции, выражающееся в неспособности мужчины иметь потомство. В настоящее время наиболее распространенным методом оценки мужской фертильности признано исследование эякулята (спермограмма). Однако этот метод не всегда позволяет выявить причину нарушений сперматогенеза. В 30-50% случаев олигозооспермия, азооспермия и прочие серьезные проблемы имеют генетическую причину.

Генетические факторы, которые наиболее часто могут приводить к мужскому бесплодию, это делеции Y-хромосомы в регионе, названном «фактор азооспермии» (AZF). Локус AZF находится в эухроматиновой области длинного плеча Y-хромосомы, картирован в сегменте Yq11.22-23 и содержит большое количество генов, ответственных за выработку и развитие сперматозоидов. В этом регионе были обнаружены как крупные делеции, обнаруживаемые с помощью цитогенетических методов, так и большое количество микроделеций. Следует учитывать, что микроделеции в локусах AZF – это делеции, не выявляемые с помощью цитогенетического анализа, но они могут приводить к широкому спектру нарушений фертильности у мужчин: от легкого снижения количества сперматозоидов до полного отсутствия половых клеток в семенных канальцах (синдром «только клетки Сертоли»).

Локус AZF условно разделен на три субрегиона: AZFa, AZFb и AZFс. В каждом субрегионе локализованы гены, вовлеченные в контроль сперматогенеза. Делеции, имеющие клинические проявления в виде тяжелой олигозооспермии и азооспермии, могут затрагивать один локус AZF или более. Субрегион AZFa содержит три гена – UTY, USP9Y и DBY. В случае делеции генов USP9Y и DBY у мужчин диагностируют азооспермию с синдромом «только клетки Сертоли», соответственно при полной делеции всего локуса наблюдается тот же феномен. Данный субрегион не содержит повторяющихся последовательностей, и его делеции встречаются с низкой частотой (примерно 5% от всех микроделеций Y-хромосомы). У пациентов с полной делецией AZFa (отсутствие обоих генов субрегиона AZFa-USP9Y и DBY) практически всегда наблюдается синдром «только клетки Сертоли» первого типа, который характеризуется полным отсутствием клеток сперматогенного ряда в семенных канальцах. В случае полной делеции субрегиона AZFa не рекомендуется выполнять процедуры по выделению сперматозоидов, так как исход процедуры для мужчин с таким типом делеции крайне неблагоприятен. Субрегион AZFb содержит последовательности, представленные в одной копии, и высокоповторяющиеся прямые и инвертированные палиндромные последовательности. В данном субрегионе картирован ген RBMY, который является высококопийным геном, при этом некоторые из этих копий являются псевдогенами. Делеции одной копии или нескольких копий гена RBMY выявляются у мужчин с азооспермией или тяжелой олигозооспермией. Делеции локуса AZFb встречаются примерно в 16% среди всех микроделеций Y-хромосомы. В случае полной делеции AZFb, а также делеции AZFb с затрагиванием AZFa обычно наблюдаются тяжелые нарушения сперматогенеза с высоким риском синдрома «только клетки Сертоли». В случае дистальной делеции AZFb и AZFc нарушения сперматогенеза могут быть менее тяжелыми. При полной делеции AZFb-субрегиона может присутствовать задержка созревания сперматозоидов в ходе сперматогенеза. Делеции субрегиона AZFc встречаются чаще всего (до 60% всех микроделеций Y-хромосомы). В этом участке находится семейство генов DAZ (Deleted in Azoospermia, гены, делетированные при азооспермии), представленное несколькими различными генами. У мужчин при сохранении двух DAZ-генов нарушения спермограммы менее выражены, чем у пациентов, у которых отсутствуют все четыре гена. Гистологическая картина яичка может быть различной, редко может наблюдаться синдром «только клетки Сертоли» второго типа, при котором в семенных канальцах присутствует только незначительное число клеток сперматогенного ряда. На гистологических биоптатах яичка обнаруживаются области сохраненного сперматогенеза. В локусе AZFc был описан новый тип Y-делеций, так называемая gr/gr-делеция, при которой наблюдается делеция маркера sY1291. При этой делеции выпадает половина субрегиона AZFc, что приводит к изменению количества копий генов, расположенных внутри этой области. У носителей gr/gr-делеций в 7 раз повышен риск развития олигозооспермии, также есть данные, что наличие этой делеции повышает риск развития герминогенных опухолей яичка. AZFc-микроделеции обычно не столь губительны для сперматогенеза, как мутации в локусах AZFa или AZFb. Об этом свидетельствует тот факт, что у 2/3 пациентов с делециями в субрегионе AZFc при биопсии яичка могут быть получены сперматозоиды для последующего их использования в процедуре ЭКО. Кроме того, в литературе есть сведения о случаях отцовства у пациентов с AZFc-делециями и олигозооспермией. 

Среди микроделеций Y-хромосомы в 15% случаев встречаются микроделеции сразу нескольких субрегионов. Анализ состояния репродуктивной системы по показателям спермограммы подтвердил, что при наличии микроделеций, затрагивающих больше одного субрегиона, практически в 100% случаев наблюдается азооспермия и синдром «только клетки Сертоли».

• В комплексе диагностических методов при обследовании бесплодной пары
• Выявленные нарушения при исследовании эякулята (спермограммы)
• Выбор адекватных способов преодоления бесплодия
• Оценка риска нарушений фертильности у сыновей мужчин с выявленными делециями AZF.

Кровь на исследования рекомендуется сдавать натощак (не менее 8 часов после последнего приёма пищи).

Кровь берется в вакуумную пробирку с К2ЭДТА или К3ЭДТА (фиолетовая крышка). Для обеспечения правильного соотношения кровь/антикоагулянт пробирка должна заполняться точно до указанного объёма. Сразу после заполнения пробирку необходимо аккуратно перемешать поворачиванием на 180º  8-10 раз (Не встряхивать!).  Укажите на этикетке пробирки Ф.И.О. пациента, дату и время взятия материала.  Не центрифугировать! Пробирку необходимо отправить в лабораторию в день взятия материала. До передачи курьеру хранить в холодильнике при температуре +2 - +8ºС.

Кровь ЭДТА

Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

Интерпретацию результатов исследования проводит лечащий врач. Интерпретация результатов исследования проводиться с учётом результатов данного исследования, анамнеза и клиники заболевания пациента и данных других исследований. На основании полученных данных врач, если это необходимо, назначит дополнительные исследования и консультацию врача-генетика. При необходимости можно дополнительно заказать L350R Заключение. Мужское бесплодие (причины азооспермии) и получить подробное заключение нашего врача-генетика.

C105 Исследование эякулята (спермограмма); L505 Анализ кариотипа

1. Михайленко Д.С., Соболь И.Ю., Ефремов Е.А., и др. Генетически обусловленные формы бесплодия у мужчин: основные характеристики и практические аспекты лабораторной диагностики. /Экспериментальная и клиническая урология. 2020; (1):96-104.
2. Черных В.Б., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., и др. Анализ микроделеций в локусе AZF у мужчин с бесплодием: совместный опыт исследований. /Медицинская генетика. 2003; 2(8):367-369.
3. Hoops C.V., Mielnik A., Goldstein M., et al. Detection of sperm in men with Y chromosome microdeletions of the AZFa, AZFb and AZFc regions. /Hum Reprod. 2003 Aug; 18(8):1660-1665.
4. Zhang F., Li L., Wang L., et al. Clinical characteristics and treatment of azoospermia and severe oligospermia patients with Y-chromosome microdeletions. /Mol Reprod Dev. 2013 Nov; 80(11):908-915.